假定你分离到一个E.coli的Thy-突变体,并推测有可能是thyA基因突变。请设计一个方案用PCR从染色体DNA扩增突变
假定你分离到一个E.coli的Thy-突变体,并推测有可能是thyA基因突变。请设计一个方案用PCR从染色体DNA扩增突变的thyA基因,测定突变的序列。(注:E.coli野生型的thyA基因的序列是已知的。)
假定你分离到一个E.coli的Thy-突变体,并推测有可能是thyA基因突变。请设计一个方案用PCR从染色体DNA扩增突变的thyA基因,测定突变的序列。(注:E.coli野生型的thyA基因的序列是已知的。)
首先你得切载体DNA,且用碱性磷酸酶去除5'-磷。第二步,把处理过的载体与BamHI切出的cDNA片段混合加入连接酶后温育,连接后将它与感受态细胞混合。最后,将混合物涂布在含抗生素的固体培养基上,杀死所有未转入载体的细胞,而转入了载体的细胞由于其抗生素抗性而存活下来。
克隆手册上提到了四种对照:①未和连接混合物混合的细菌涂平板;②转入未切过的载体的细胞涂平板;③酶切过但未用碱性磷酸酶去除5'-磷的载体,未加外源cDNA片段但加连接酶温育的混合物与感受态细胞混合涂平板;④载体酶切过,碱性磷酸酶处理过,无cDNA片段加连接酶温育后和感受态细胞混合涂平板。
第一次做该实验的实验组和四个对照组借用同宗的感受态细胞,但所有平板上菌落太多而无法数清(见表16-3-40)。第二次做时,采用自己准备的细胞,但没有一个平板上有菌落长出。你又做了一次,这次的结果见表16-3-40。你从样品中挑了几个菌落,提取质粒DNA后用BamHI处理,有九个菌落生成和线状载体相同大小的一条带,但另三个菌落含有你需要克隆的cDNA片段。
表16-3-40 Results of Your cDNA Cloning Endeavor | ||||
样品制备 | 实验结果 | |||
1 | 2 | 3 | ||
对照1 对照2 对照3 对照4 实验样品 | 只有细胞 未切的载体 无磷酸化酶、无cDNA 无cDNA | TMTC TMTC TMTC TMTC TMTC | 0 0 0 0 0 | 0 >1000 435 25 34 |
TMTC=too many to count |
A、VTLKKIRKDYVKLMATTENAVQQ
B、MALWMRLLPLLALLALWGPDPAA
C、GSLQKRGIVEQCCTSICSLYQLE
D、MALVRLPVWIFVAALLIASSSTV
A、在成熟期进行一些在关键期内发生的一些皮层可塑性相关实验,是可以发生可塑性的改变的
B、在成熟期,进行有奖赏的诱导是可以改变可塑性的
C、在成熟期,进行惩罚诱导是可以改变可塑性的
D、在成熟期,弱视群体进行单眼剥夺是可以纠正的
A、南移和东迁
B、南移和西迁
C、北移和东迁
D、北移和西迁
A、碳
B、氮
C、磷
D、钠
为了保护您的账号安全,请在“简答题”公众号进行验证,点击“官网服务”-“账号验证”后输入验证码“”完成验证,验证成功后方可继续查看答案!