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提问人：网友后慧珍
发布时间：2022-01-07
[主观题]
Ig单体被胃蛋白酶酶切后，生成一个()片段和()片段。
Ig单体被胃蛋白酶酶切后，生成一个（)片段和（)片段。
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A、核小体核心颗粒部位
B、螺线管
C、超螺线管
D、核小体的DNA连接部
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第3题
你想把一段cDNA克隆到一表达载体上，这样便能在E.coli中大量生产该蛋白。cDNA是BamHI切下的片段，准备将其插入到载体的BamHI位点上，这次是你首次做克隆，因而严格遵照指南上的步骤。
首先你得切载体DNA，且用碱性磷酸酶去除5'-磷。第二步，把处理过的载体与BamHI切出的cDNA片段混合加入连接酶后温育，连接后将它与感受态细胞混合。最后，将混合物涂布在含抗生素的固体培养基上，杀死所有未转入载体的细胞，而转入了载体的细胞由于其抗生素抗性而存活下来。
克隆手册上提到了四种对照：①未和连接混合物混合的细菌涂平板；②转入未切过的载体的细胞涂平板；③酶切过但未用碱性磷酸酶去除5'-磷的载体，未加外源cDNA片段但加连接酶温育的混合物与感受态细胞混合涂平板；④载体酶切过，碱性磷酸酶处理过，无cDNA片段加连接酶温育后和感受态细胞混合涂平板。
第一次做该实验的实验组和四个对照组借用同宗的感受态细胞，但所有平板上菌落太多而无法数清(见表16-3-40)。第二次做时，采用自己准备的细胞，但没有一个平板上有菌落长出。你又做了一次，这次的结果见表16-3-40。你从样品中挑了几个菌落，提取质粒DNA后用BamHI处理，有九个菌落生成和线状载体相同大小的一条带，但另三个菌落含有你需要克隆的cDNA片段。
| 表16-3-40 Results of Your cDNA Cloning Endeavor | ||||
| 样品制备 | 实验结果 | |||
| 1 | 2 | 3 | ||
| 对照1 对照2 对照3 对照4 实验样品 | 只有细胞 未切的载体 无磷酸化酶、无cDNA 无cDNA | TMTC TMTC TMTC TMTC TMTC | 0 0 0 0 0 | 0 ＞1000 435 25 34 |
| TMTC=too many to count | ||||
