通常是所构建转基因载体的部分,包括标记基因、抗性基因和外源基因及其之间的连接序列。()
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A. 编码一种限制性内切核酸酶,在转化细胞时用于切割载体
B. 编码蓝色色素产物,可用于示踪转化的细胞
C. 编码一种酶,将RNA转化为DNA
D. 编码一种抗生素抗性的酶
E. 编码一种可检测的酶,当基因内部的位点插入任何外源片段,ORF遭到破坏时,产物即不能表达
A. 标志补救筛选
B. 插入表达筛选
C. 抗性筛选
D. 限制性内切酶酶切图谱分析
E. 核酸分子杂交筛选
因为表达载体中含有抗性基因,能表达抵制抗生素的酶,所以只有含有载体的大肠杆菌才可以在含有抗生素的培养皿上生长,而未被转化的细菌则因受到抗生素的抑制而死掉。
你还参照实验手册做了下面四组对照:
对照一、在含有抗生素的培养皿上面涂布未被转化的(即不含有载体的)大肠杆菌感受态细胞(cells alone)。
对照二、用未被酶切的载体直接转化大肠杆菌感受态细胞,将产物涂布在含有抗生素的培养皿上面(vector alone)。
对照三、用BamHI酶切载体DNA后,不用碱性磷酸酶处理,不需要cDNA,直接加入DNA聚合酶,然后转化、涂板(Omit phosphatase,omit eDNA)。
对照四、除使用碱性磷酸酶外,其它与对照三相同(Omit cDNA)。
你一共做了三次实验,在第一次中所有的平板中都长出很多细菌。在第二次实验中所有的平板中都没有长细菌。在第三次实验中你得到了较好的结果,转化成功,具体克隆数见下表:
Preparation of Sample | NO.of Colonies | |||
1 | 2 | 3 | ||
Control 1 | Ceils alone | TMTC | 0 | 0 |
Control 2 | Uneut vector | TMTC | 0 | >1000 |
Control 3 | Omit phosphatase,omit cDNA | TMTC | 0 | 435 |
Control 4 | Omit CDNA | TMTC | 0 | 25 |
Experimental sample | TMTC | 0 | 34 | |
TMTC=too many to count |
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