打算将一个cDNA克隆到一个表达载体,以便在E.coli中大量制备相应的蛋白质。这个cDNA的两侧具有BamH Ⅰ的位点,
实验中同时设置了四个对照:
对照1:将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上。
对照2:将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。
对照3:将经切割(但未用碱性磷酸酶处理)并用连接酶连接(但没有cDNA片段)的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。
对照4:将经切割(并用碱性磷酸酶处理过)并用DNA连接酶连接(但没有cDNA片段)的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。
在进行第一次实验时,感受态细胞不是自己制备的,结果在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落(表Q25.2)。在第二次实验中,自己制备感受态细胞,但这一次,所有的平板上都没有菌落生长(表Q25.2)。接着又进行了第三次实验,这次得到了转化子(表Q25.2)。从实验平板上挑出12个菌落,分离了质粒DNA,并用BamH Ⅰ进行切割,其中9个克隆产生大小同载体一样的单一的一条带,另三个克隆中切出一个cDNA片段,实验终于获得成功。
表Q25.2 cDNA克隆的结果
制备的样品 | 实验结果 | ||
1 | 2 | 3 | |
对照1 只有细胞 | TMTC | 0 | 0 |
对照2 未切的载体 | TMTC | 0 | >1000 |
对照3 省去磷酸酶处理,无cDNA | TMTC | 0 | 435 |
对照4 无cDNA | TMTC | 0 | 25 |
实验样品 | TMTC | 0 | 34 |
注:TMTC=too many to count,多到无法计数。