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提问人:网友kobygao 发布时间:2022-01-07
[单选题]

使用克隆时同样的限制性内切酶切割4KB质粒载体和1KB外源DNA重组形成的重组质粒后,琼脂糖电泳分析的结果是 。

A.一条5KB的条带

B.两条条带,分别时2KB和3KB

C.两条条带,分别是1KB和4KB

D.一条4KB的条带

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1天前
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1天前
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1天前
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1天前
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1天前
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1天前
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1天前
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1天前
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下村修发现绿色荧光蛋白时知道它在生物学研究中的作用
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第2题
限制酶识别序列为()个碱基,则其切割频率的理论值应是4n。
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第3题
打算将一个cDNA克隆到一个表达载体,以便在E.coli中大量制备相应的蛋白质。这个cDNA的两侧具有BamH Ⅰ的位点,因此计划将它从BamH Ⅰ的位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中的方法进行:载体用BamH Ⅰ切割以后,立即用碱性磷酸酶处理除去5'磷酸;接着将处理过的载体同用BamH Ⅰ切割的cDNA片段混合,加入DNA连接酶后进行温育,连接之后,将DNA同已处理过的可以接受DNA的细菌感受态细胞混合。最后,将混合物涂布在加有抗生素固体培养基的平板上。由于载体上带有抗生素的抗性基因,所以,转化的细菌能够存活。

实验中同时设置了四个对照:

对照1:将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上。

对照2:将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。

对照3:将经切割(但未用碱性磷酸酶处理)并用连接酶连接(但没有cDNA片段)的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。

对照4:将经切割(并用碱性磷酸酶处理过)并用DNA连接酶连接(但没有cDNA片段)的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。

在进行第一次实验时,感受态细胞不是自己制备的,结果在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落(表Q25.2)。在第二次实验中,自己制备感受态细胞,但这一次,所有的平板上都没有菌落生长(表Q25.2)。接着又进行了第三次实验,这次得到了转化子(表Q25.2)。从实验平板上挑出12个菌落,分离了质粒DNA,并用BamH Ⅰ进行切割,其中9个克隆产生大小同载体一样的单一的一条带,另三个克隆中切出一个cDNA片段,实验终于获得成功。

表Q25.2 cDNA克隆的结果

制备的样品

实验结果

1

2

3

对照1 只有细胞

TMTC

0

0

对照2 未切的载体

TMTC

0

>1000

对照3 省去磷酸酶处理,无cDNA

TMTC

0

435

对照4 无cDNA

TMTC

0

25

实验样品

TMTC

0

34

注:TMTC=too many to count,多到无法计数。

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第4题
经过测序分析,欲克隆的一段DNA序列如下(只列出单链部分):

GAATTCCGGCGGCGGGGTTTTCATTATTATGATCGTTGACATGGGACAAGGGGCTCCTATAATAGGTGC

ATTTGTAGGGGATGTGGCCACATGATAGCGCGTCGAGGCATTCAGGACCGATATYGTCATATTGCCAGC

ATGCTGCAGCGCGCCAACTTAGTTACAACITATACGATGAHTiAAAAAAAGAATATCAAATAGCCATCC

ACCCGAAAGACCACCGCAAGTATCGGTACGATCGTACCAGCACACACCACAGTCGCCAGTCTGTTACCA

AATAATAAAGTTGATAATTAATTCACATCTACCTGGGTAACCCAGGTAGATGTGAAbHTiAGAATTC

这段序列被克隆到某多拷贝质粒的一个EcoR I限制性位点,并表达了一个小肽,请找出这段序列中所含有的以下几个功能位点:

(1)两个EcoR I位点;

(2)一个启动子;

(3)一个转录起始位点;

(4)一个转录终止子;

(5)一个核糖体结合位点;

(6)一个翻译起始密码子;

(7)一个翻译终止子。

另请标出相应的调控序列及编码区的氨基酸。

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第5题
关于外源基因的诱导表达的说法,正确的是 。

A、扩大培养细胞需要细菌生长到合适的生长密度才可诱导表达

B、该实验表达AKP使用的诱导物是IPTG

C、表达蛋白需要使用表达菌株,而不是克隆菌株

D、加入诱导物后,可以在37度诱导表达

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第6题
常用的核酸水平筛选重组子方法有 。

A、PCR法

B、直接电泳检测法

C、限制性酶切图谱法

D、核酸杂交检测法

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第7题
PCR法可以确定某个克隆是否是重组子,但是无法确定其重组质粒中外源DNA的大小是否正确。
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第8题
筛选可以判定某个克隆是重组子还是非重组子。
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第9题
测定酶活性和蛋白分子大小是蛋白水平的筛选。
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第10题
限制性酶切筛选法只能确定是转化子还是非转化子。
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